南方医科大学学报

作者：吕晓梅, 周知音, 朱 丽, 周 吉, 黄慧丹, 张 超, 刘晓平

单位：皖南医学院药物筛选与评价研究所，2附属弋矶山医院生殖医学中心，安徽 芜湖 241000

关键词：硫氧还蛋白还原酶1；慢病毒包装；过表达；细胞模型,

目的 构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株，为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法 通过PCR扩增，连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-PuroTXNRD1，转染HEK293细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行：①TrxR1过表达HEK293细胞：pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞；②对照HEK293细胞：pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞；③正常HEK293细胞；通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况；通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力；通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果 构建载体经DNA测序，成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达，且酶活力也同样显著上升（P<0.005）；而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降（P<0.005）。结论 通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体，成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株，该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗，因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。

来源：2022年第4期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2022年第4期