南方医科大学学报

作者：汪 珂, 于 言, 韩 日, 王显文, 赵云腾, 唐浩程, 李 刚

单位：南方医科大学南方医院耳鼻喉科，广东 广州 510515

关键词：类器官；鼻粘膜；气液界面；分化培养；3D细胞模型,

目的 建立分化程度可控、能够重现来源组织结构和功能的人类鼻粘膜类器官模型。方法 采集手术切除的新鲜中鼻甲和鼻息肉组织，将消化过滤的鼻粘膜上皮细胞分为连续“扩增”培养组（EO组）及“扩增-分化”分段培养组（DO组）。分别在基于气液界面进行体外3D类器官培养，通过STR鉴定、电镜及免疫组化染色分别对两组鼻粘膜类器官的结构、细胞组成及纤毛功能进行鉴定。再通过PAS染色对DO组中分化后的鼻粘膜类器官分泌功能进行鉴定。结果 整个培养期间，均能生长出直径逐渐增大的空泡状或实心球状3D类器官。培养第16天，DO组多为空泡状类器官，EO组多为实心球状类器官，DO组空泡数比例大于EO组（[ 21.67±8.57）% vs（54.67±13.26）%，P<0.05]。将鼻粘膜类器官与来源组织同时进行STR检测，匹配度为100%。培养第21天，DO组鼻粘膜类器官扫描及透射电镜显示纤毛超微结构，而EO组多显示出短绒毛结构。免疫组化染色结果显示，呼吸区粘膜主要包含P63（基底细胞）、β-tubulin（纤毛柱状细胞）、MUC5AC（杯状细胞）。相比EO组，DO组类器官纤毛细胞数[(7.95± 1.81)% vs (27.04±5.91)%，P<0.05]及杯状细胞数[(14.46±0.93)% vs (39.85±5.43)%，P0.05）。DO组中分化后的鼻粘膜类器官糖原染色呈阳性表达。结论 本研究首次采用“扩增-分化”分段式培养法，培养出能够在体外长期稳定生长、高度拟似来源组织形态结构和功能（纤毛功能及分泌功能），且分化程度可控的鼻粘膜类器官。

来源：2022年第6期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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