南方医科大学学报

作者：江文豪, 钱垂文

单位：暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系，广东省基因工程药物重点实验室，基因药物国家工程研究中心，广东 广州 510632

关键词：重组人釉原蛋白；壳聚糖；丙二醇藻酸酯；人牙周膜成纤维细胞,

目的 评价新型温敏性重组人釉原蛋白（rhAm）载体和传统丙二醇藻酸酯（PGA）载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法 分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm，2%的壳聚糖（CS）和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液（βGP）作为交联剂制备CS-βGP-rhAm凝胶；表征通过检测黏度、凝固时间、pH值、溶胀率、体外生物降解率和缓释性能来评估；通过观察金黄色葡萄球菌生长状况比较材料的抗菌效果；生物相容性评估是在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）上利用CCK8检测各组细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-qPCR检测成骨基因mRNA表达，Western blot检测蛋白的表达水平，碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组细胞成骨分化情况。结果 PGA-rhAm具有黏度值3.262±0.055 Pa.s，CS-βGP-rhAm在37 ℃下具有6 min凝固成型能力、接近口腔环境的pH值、约90%的溶胀率，同时缓释rhAm可维持2周以上，自身降解时间维持3周以上。CS-βGP负载rhAm相比PGA负载rhAm更有效抑制金黄色葡萄球菌生长（P<0.001）。细胞水平上，CS-βGP是否负载rhAm都可促进细胞增殖（P<0.001），PGA促进细胞增殖效果不显著。划痕实验显示，CS-βGP和PGA负载rhAm后均可促进细胞迁移（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot结果显示，CS-βGP负载rhAm能促进RUNX2、OCN mRNA水平（P<0.001），上调Ki67（P<0.001）、RUNX2（P<0.001）、Collagen Ⅰ（P<0.01）、β-catenin（P<0.05）蛋白表达。PGA负载rhAm促进RUNX2（P<0.05）、OCN（P<0.01）mRNA水平表达，蛋白水平变化无统计学意义。CS-βGP组ALP染色蓝紫色颗粒数增加，PGA组无明显变化。结论 CS-βGP具有能缓释rhAm的性能，同时相比传统的PGA载体，CS-βGP具有温度成型的特点、抑制金黄色葡萄球菌生长的性能、显著提高hPDLFs的生物活性并且负载rhAm后不影响其生物活性。

来源：2022年第9期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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