南方医科大学学报

作者：刘 泽, 尤 达, 李 勇, 何咏梅, 李阿芳, 李 潘, 李春艳

单位：湘南学院护理学院，临床学院，湖南 郴州 423000；湖南中医药大学护理学院，湖南 长沙 410000

关键词：Numb；mTOR复合物1；AMP活化蛋白激酶；V1G1；NRK-52E细胞,

目的 探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）复合物1（mTORC1）信号通路活性的影响及潜在的分子机制。方法 建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c 小鼠急性肾损伤模型，分为4组：NC-siRNA、Numb-siRNA、NCsiRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂。免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布；Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达。分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞。体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型，分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+氨基酸刺激组和 Numb-siRNA+氨基酸刺激组。Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达，检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达。V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞，分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组；Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达。结果 与NC-siRNA组相比，Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调（P<0.05），但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布；与对照组小鼠相比，顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调（P<0.05），而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调（P<0.05）。在NRK-52E细胞中，与氨基酸饥饿组相比，氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调（P<0.05），而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调（P<0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中，p-AMPK的蛋白表达均下调（P<0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中，V1G1的蛋白表达下调（P<0.05），上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达，可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低（P<0.05）。结论 Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化。

来源：2022年第10期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2022年第10期