南方医科大学学报

作者：王欢岚, 刘 红, 张燕敏, 陈伟栋

单位：武汉市第一医院（武汉市中西医结合医院）肾内科，湖北 武汉 430022

关键词：糖尿病肾病；miR-34a；Notch信号通路；足细胞；凋亡,

目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病（DN）足细胞损伤及凋亡的影响。方法 体外实验：通过RT-PCR法检测高糖（30 mmol/L）环境下足细胞中miR-34a表达水平，构建miR-34a过表达足细胞系（miR-34a组）及其阴性对照（miR-NC组），使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系，构建Notch 1过表达足细胞系（Notch 1组）和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系（miR-34+Notch 1组）；采用CCK-8法检测足细胞存活情况，流式细胞法检测细胞凋亡情况，Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平。体内实验：通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组（n=15/组），另选15只不做干预小鼠为对照组，miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)]，连续注射3 d，4周后，HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况，Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白表达水平。结果 高糖环境下足细胞中miR-34a表达水平低于正常糖诱导下足细胞和高渗透压下作用下的足细胞（P<0.05），miR-34a组足细胞中Notch 1表达水平低于miR-NC组（P<0.05）；Notch 1 wt/miR-34a组荧光素酶活力值低于Notch 1 wt组（P0.05）；miR-34a组足细胞的A值高于miR-NC组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均低于miR-NC组（P<0.05）；Notch 1组足细胞的A值低于miR-NC组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-NC组（P<0.05）；miR-34a+Notch 1组足细胞的A值低于miR-34a组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-34a组（P<0.05）。对照组小鼠肾组织结构清晰完整，模型组小鼠肾小球肿胀、体积增大，miR-34a组小鼠肾组织病变程度得到改善；模型组小鼠肾组织 miR-34a 表达水平低于对照组（P<0.05），miR-34a 组小鼠的肾组织 miR-34a 表达水平高于对照组（P<0.05）；模型组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平高于对照组（P<0.05），miR-34a组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平低于模型组（P<0.05）。结论 miR-34a可通过靶向作用Notch 1改善DN足细胞损伤和凋亡。

来源：2022年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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