南方医科大学学报

作者：赵齐林, 王 楠, 李亚霁, 吴庆琛, 吴兰香

单位：重庆医科大学附属第一医院心胸外科，生命科学研究院，重庆 400016

关键词：长链非编码RNA；lnc-TMEM132D-AS1；NSCLC；奥希替尼；获得性耐药,

目的 建立奥希替尼获得性耐药非小细胞肺癌（NSCLC）细胞模型，筛选耐药前后差异表达的长链非编码RNA（lncRNAs），并探讨筛选的lncRNA在奥希替尼获得性耐药中的作用及分子机制。方法 奥希替尼获得性耐药细胞株H1975_OR和HCC827_OR是由奥希替尼敏感的NSCLC细胞株H1975和HCC827（分别命名为H1975 _S和HCC827_ S）建立而来；通过CCK-8、克隆形成及流式凋亡实验检测细胞对奥希替尼的敏感性；RNA测序（RNA-seq）、实时荧光定量PCR（qPCR）技术筛选耐药前后差异表达的lncRNAs；采用CCK-8、克隆形成及Transwell实验检测所筛选的lncRNA在NSCLC细胞奥希替尼获得性耐药中的作用；通过核质分离、生物信息学分析及qPCR技术观察该lncRNA的亚细胞定位，并探索其下游互作分子。结果H1975_OR与HCC827_OR对奥希替尼的耐药指数分别为598.70和428.82（P<0.001）。耐药株的生长增殖与克隆形成能力显著提高，而凋亡率降低（P<0.01）。RNA-seq提示H1975_OR与H1975_S之间以及HCC827_OR与HCC827_S之间有共同差异表达的lncRNAs 34个。qPCR验证发现，lnc-TMEM132D-AS1在耐药性NSCLC细胞株中升高最为显著（P<0.01）。TCGA数据库分析提示，lnc-TMEM132D-AS1在NSCLC组织中的表达水平高于癌旁组织（P<0.001），且与患者预后不良相关（P<0.05）。Lnc-TMEM132D-AS1过表达可提高奥希替尼处理下敏感株的生长增殖、克隆形成及迁移能力（P<0.05），而敲低其表达水平可部分恢复耐药株的奥希替尼敏感性（P<0.01）。lnc-TMEM132D-AS1主要定位在胞质，生物信息学分析提示hsa-miR-766-5p是其潜在靶点，两者表达水平呈负相关（P<0.01）。对hsa-miR-766-5p下游的靶mRNAs分析提示相关基因主要集中于Ras信号通路。结论 Lnc-TMEM132D-AS1在奥希替尼获得性耐药NSCLC细胞株中表达显著上调，明显降低了NSCLC细胞对奥希替尼的敏感性，是NSCLC奥希替尼获得性耐药的潜在生物标志物及治疗靶标。

来源：2023年第2期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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