南方医科大学学报

作者：刘 屿, 曾 莲, 王卫红, 杨艳玲, 王 洲, 刘建启, 李 卫, 孙婧宇, 余晓宏

单位：昆明医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，云南 昆明 650106；云南大学附属医院（云南省第二人民医院、云南省眼科医院）口腔内科，云南 昆明 650021

关键词：牙周炎；骨髓间充质干细胞；外泌体；miR-335-5p；牙周膜干细胞；成骨分化,

目的 探讨人骨髓间充质干细胞（hBMMSCs）外泌体来源的 miR-335-5p 调控 DKK1 对人牙周炎中牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化的影响及其作用机制。方法 提取hBMMSCs外泌体，通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体，通过TNF-α诱导PDLSCs构建牙周炎细胞模型。提取的外泌体与TNF-α诱导的PDLSCs共同培养。qRT-PCR检测miR-335-5p，促炎因子 IL-1β、IL-6、IL-8 和成骨标志基因 RunX2、OCN、BMP-2 mRNA 表达。茜素红和 ALP 染色检测钙结节，Western blot检测DKK1蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与DKK1的靶向关系。结果 提取的hBMMSCs外泌体中CD9和CD81显著表达（P<0.05）。hBMMSC外泌体降低TNF-α诱导的hPDLSCs中促炎细胞因子IL-1β（P<0.01）、IL-6（P<0.05）、IL-8（P<0.05）的mRNA表达并促进成骨标志基因RunX2（P<0.01）、OCN（P<0.05）、BMP-2（P<0.001）mRNA和钙结节生成。miR-335-5p在hBMMSCs外泌体中高表达，过表达miR-335-5p靶向下调DKK1（P<0.001），抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达（P<0.001），促进成骨标志物BMP-2、OCN、RunX2的 mRNA表达以及钙结节生成（P<0.001）。结论 hBMMSC外泌体来源的miR-335-5p靶向下调DKK1，促进hPDLSCs成骨分化，抑制牙周炎的发展进程。

来源：2023年第3期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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