南方医科大学学报

作者：许家豪, 耿梦雅, 刘海军, 裴文俊, 顾 静, 漆梦湘, 章 尧, 吕 坤, 宋迎迎, 刘苗苗, 胡 鑫, 余 翠, 何春玲, 王李卓, 高家林

单位：皖南医学院弋矶山医院内分泌科，弋矶山医院内分泌糖尿病研究所，临床医学院，安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室，基础医学院生化教研室，中心实验室，重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室，皖南医学院第二附属医院内分泌科，安徽 芜湖 241002

关键词：Sidt2,人肝脏细胞,凋亡,自噬,增殖,

目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型，检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平，MDC染色观察自噬体形成情况，通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响，并且使用0、10、25、50、100、200 μmol/L的氯喹（CQ）摸索肝脏细胞CQ饱和浓度，检测对其自噬流的影响，以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组。Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加，自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加（P<0.05）。结果显示50 μmol/L CQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态，50 μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加（P<0.05），且CQ进一步降低肝脏细胞活性，并促进其凋亡水平（P<0.05）。结论 在离体水平上，Sidt2基因剔除后，HL7702细胞可表现自噬通路的异常，并且不通过抑制自噬溶酶体途径介导和调控凋亡。

来源：2023年第4期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2023年第4期