南方医科大学学报

作者：刘 迁, 戴宇阳, 于华裔, 沈 颖, 邓建忠, 陆文斌, 金建华

单位：江苏大学附属武进医院/徐州医科大学武进临床学院，肿瘤科，江苏 常州 213017；常州市分子诊断与肿瘤精准医学重点实验室/江苏大学武进分子诊断与肿瘤精准医学研究院，江苏 常州 213017

关键词：NKD1；YWHAE；葡萄糖吸收；结肠癌,

目的 通过研究NKD1与YWHAE调控关系，分析NKD1促进肿瘤细胞增殖的新作用机制。方法 实验分组：（1）对照组：转染pcDNA3.0质粒的HCT116细胞、转染NC-siRNA的SW620细胞、正常HCT116细胞、正常SW620细胞；（2）实验组：转染pcDNA3.0-NKD1 质粒的 HCT116 细胞、转染 NKD1 siRNA 的 SW620 细胞、HCT116-NKD1 细胞、SW620-nkd1-/-细胞、转染pcDNA3.0-YWHAE质粒的SW620-nkd1-/-细胞。采用Western blot及qRT-PCR实验检测结肠癌细胞中过表达或敲除NKD1对YWHAE的蛋白及mRNA水平变化的影响。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测NKD1是否结合YWHAE基因启动子区。通过双荧光素酶报告基因实验分析NKD1对YWHAE基因启动子活性的调控作用。此外，采用免疫荧光实验分析NKD1与YWHAE相互作用情况。葡萄糖检测实验分析NKD1对肿瘤细胞吸收葡萄糖的调控作用。结果 与对照组相比，过表达（或敲除）NKD1不仅在蛋白水平增强（或降低）YWHAE的表达，还在mRNA水平增加（或降低）其表达（P<0.001）。ChIP实验显示NKD1蛋白能够结合YWHAE启动子序列，双荧光素酶报告基因实验表明在结肠癌细胞中过表达（或敲降）NKD1能显著增强（或降低）YWHAE启动子的转录活性（P<0.05）。此外，免疫荧光结果显示NKD1蛋白与YWHAE蛋白在结肠癌细胞内相互结合。葡萄糖水平分析实验表明，敲除NKD1明显降低结肠癌细胞对葡萄糖的吸收水平（P<0.01），而在敲除NKD1的细胞中过表达YWHAE，则细胞对葡萄糖吸收能力得到恢复（P<0.05）。结论 结肠癌细胞中NKD1蛋白通过激活YWHAE基因的转录活性，促进其表达，从而促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收。

来源：2023年第4期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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