南方医科大学学报

作者：黄 伊, 丁 信, 黄 楠, 陈灿雄, 邓小燕

单位：广州市传染性疾病临床快速诊断与预警重点实验室，广东 广州 510180；广州医科大学金域检验学院，广东 广州 510180

关键词：钼酸盐转运蛋白；同源重组；自杀载体；奇异变形杆菌,

目的 基于同源重组方法构建奇异变形杆菌钼酸盐转运蛋白编码基因modABC基因敲除株，并采用电感耦合等离子质谱法检测胞内钼含量，探究modABC基因对奇异变形杆菌生物学特性的影响。方法 利用自杀载体pCVD442通过同源重组方法构建modABC基因敲除株ΔmodABC，并通过PCR及Sanger测序鉴定；采用电感耦合等离子质谱法测定亲本株PMI 和敲除株ΔmodABC 胞内钼酸盐含量，比较亲本株PMI 和敲除株ΔmodABC 在体外有氧和厌氧条件下的生存能力。结果 利用融合PCR成功将目的基因替换为卡那霉素抗性基因Kn，与自杀载体pCVD442重组并转导到奇异变形杆菌亲本株PMI，随后发生同源重组，modABC 基因被敲除，通过 PCR 及 Sanger 测序分析证实基因组目的基因已缺失，成功构建了 modABC 基因敲除株ΔmodABC；敲除株ΔmodABC 胞内钼含量约为1.22 mg/kg，明显低于亲本株PMI（1.46 mg/kg，P<0.001）；亲本株PMI和敲除株ΔmodABC在 LB液体培养基中具有相似的有氧生长曲线，二者在厌氧条件下细菌的增殖速率均明显下降，并且在硝酸盐存在的LB培养基中，敲除株ΔmodABC的厌氧生长受到明显抑制（P<0.005）。结论 基于自杀载体 pCVD442 的同源重组可成功用于奇异变形杆菌modABC基因敲除，modABC基因参与奇异变形杆菌钼酸盐的摄取并与细菌厌氧硝酸盐生长相关。

来源：2023年第5期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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