南方医科大学学报

作者：邵荣瑢, 杨 子, 张文静, 张 诺, 赵雅静, 张小凤, 左芦根, 葛思堂

单位：蚌埠医学院第一附属医院心电图室，胃肠外科，检验科，中心实验室，安徽 蚌埠 233004；蚌埠医学院临床医学院，组织移植安徽省重点实验室，安徽 蚌埠 233030

关键词：炎症性肠病,克罗恩病,茯苓酸,肠屏障,凋亡,

目的 明确茯苓酸（PA）对2，4，6三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的小鼠克罗恩病（CD）样结肠炎的作用效果及可能机制。方法 将24只野生型小鼠随机分为对照组（WT组）、模型组（TNBS组）和PA干预组（PA组），每组8只。TNBS组和PA组采用TNBS诱导CD样结肠炎；PA组在TNBS造模的同时给予PA干预[5 mg/（kg·d），腹腔注射]，而WT组和TNBS组则每日给予等量的生理盐水腹腔注射。1周后处死小鼠，采用疾病活动度（DAI）评分、体质量改变、结肠长度、组织学炎症评分和小鼠结肠黏膜肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平（ELISA检测）评估肠炎程度；采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-dextran）、肠型脂肪酸结合蛋白（I-FABP）及跨上皮电阻抗值（TEER）评估小鼠肠屏障功能；TUNEL染色检测各组小鼠肠上皮细胞凋亡情况；通过网络药理学预测PA治疗CD可能的作用靶点；采用String平台和Cytoscape 3.7.2软件进行蛋白互作网络构建；采用David数据库对预测靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析；应用AutoDock 4.2.6进行PA与关键靶点的分子对接；采用Western blot检测各组小鼠结肠黏膜组织中p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平以验证KEGG富集分析结果。结果 PA组小鼠DAI评分、组织学炎症评分、体质量降低幅度和结肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著低于TNBS组（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）；PA组小鼠结肠长度显著长于TNBS组（P<0.05），但仍短于WT组（P<0.05）；PA组小鼠血清中FITC-dextran和I-FABP水平较TNBS组显著降低（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05），而肠组织TEER水平较TNBS组显著升高（P<0.05），但仍低于WT组（P<0.05）；PA组小鼠肠上皮细胞凋亡率显著低于TNBS组（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）。通过数据库共筛选到PA和CD交集靶点248个；构建PPI网络得到PA作用于CD的核心靶点分别为EGFR、HRAS、SRC、MMP9、STAT3、AKT1、CASP3、ALB、HSP90AA1、HIF1A；GO功能富集分析显示PA对细胞凋亡进程具有负向调控作用，KEGG富集分析显示PA治疗CD可能与PI3K/AKT信号通路密切相关；分子对接显示PA与AKT1、ALB、EGFR、HSP90AA1、SRC及STAT3等6个靶点有较强的结合力；同时，Western blot检测结果显示PA组小鼠结肠黏膜组织中p-PI3K和p-AKT水平较TNBS组显著降低（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）。结论 PA可能通过调控PI3K/AKT信号通路拮抗肠上皮细胞凋亡保护肠屏障从而缓解TNBS小鼠CD样肠炎。

来源：2023年第6期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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