南方医科大学学报

作者：潘中武, 李思琪, 王耀辉, 刘海军, 桂 琳, 董博翰

单位：皖南医学院医学微生物学与免疫学教研室，生物化学教研室，药学院，安徽 芜湖 241002

关键词：肿瘤细胞裂解物；小鼠脾细胞；肺癌细胞；抗肿瘤免疫；高迁移率族蛋白B1,

目的 探讨低含量高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的肿瘤细胞裂解物（TCL）对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法 反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸（GA）抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达，进而制备低含量HMGB1的TCL（LH-TCL）。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL（NH-TCL）。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组，用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞（DC）表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡，用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组，用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况，酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组，并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验，采用CCK8法检测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞的活性。分为未活化DC组、NH-TCL活化的DC组、LH-TCL活化的DC组及PBS对照组，通过体内抑瘤实验，评估DC过继免疫细胞疗法抑制小鼠皮下移植瘤生长的效果。结果 GA作用后的Lewis肺癌细胞制备的TCL中，HMGB1的含量显著降低（P<0.05）。与NH-TCL相比，LH-TCL具有更好的减少DC 凋亡的能力（P<0.001），并促进DC表面CD86的表达和IL-12的分泌，而负载LH-TCL的DC也能更好地激活脾淋巴细胞并诱导更强的抗肿瘤免疫作用（P<0.01）。在体外，负载LH-TCL的DC激活脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显著提高（P<0.01）；在实验动物体内，免疫负载LH-TCL的DC可明显抑制肿瘤组织生长（P<0.05）。结论 用LH-TCL负载DC，可以增强DC诱导的抗肿瘤免疫作用，提高DC过继免疫细胞治疗的疗效，为该免疫治疗方法的改进提供了一个新的途径。

来源：2023年第6期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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