南方医科大学学报

作者：姚婉瑜, 汪枭睿, 杨 雨, 游俊雄, 金军国, 曾 平, 韩钦芮, 姚学清, 孙学刚, 周 瑾

单位：南方医科大学中医药学院分子生物学实验室，生物医学工程学院广东省组织构建与检测重点实验室，广东 广州 510515；广东省人民医院，广东 广州 519041；南方医科大学中西医结合医院，广东 广州 510315

关键词：小白菊内酯；结直肠癌；程序性坏死；纳米颗粒；T细胞耗竭,

目的 研究小白菊内酯（PTL）诱导结直肠癌细胞程序性坏死，并通过调节T细胞耗竭抑制结直肠癌的发展的机制，并通过构建其靶向脂质体改进其临床应用。方法 通过CCK8 实验检测不同结直肠肿瘤细胞经PTL处理后的增殖能力。利用ROS 与LDH 检测分析PTL诱导MC38细胞死亡的方式并进行蛋白免疫印迹分析。将24只小鼠随机分成对照组（等量生理盐水）、低剂量PTL组（5 mg/kg）与高剂量PTL组（15 mg/kg），通过在小鼠腹股沟皮下注射MC38细胞构建皮下瘤模型，给药后检测各组小鼠皮下瘤的重量与CD8+ T细胞的浸润情况，分析CD8+ T细胞耗竭表型的变化。构建PTL脂质体并对其进行表征。通过在小鼠回盲部移植肿瘤构建结直肠癌原位移植瘤模型，将32只小鼠随机分成对照组（等量生理盐水）、PTL处理组（100 μg/mL）、低剂量靶向脂质体TCP-1-PTL-LNPs组（100 μg/mL）和高剂量TCP-1-PTL-LNPs组（200 μg/mL），尾静脉注射给药，通过免疫组化分析CD8在肿瘤中的表达情况。结果 多种结直肠癌细胞（SW480、DLD1、HCT116和MC38）在PTL作用下随着药物浓度梯度增加细胞活力逐渐下降。在MC38细胞中，这一效应可被抑制剂Nec-1拮抗，同时免疫蛋白印迹分析显示经PTL处理细胞出现RIP3和MLKL的磷酸化。在小鼠皮下瘤模型中，经流式细胞术分析，与对照组或低剂量组相比，高剂量PTL组出现了肿瘤CD3+ CD8+ T细胞的浸润增加（P<0.01），同时PD1hiTIM3+ T细胞比例显著增加（P<0.01），而PD1loTIM3-T细胞比例显著降低（P<0.01）。在小鼠结直肠癌原位移植瘤模型中，经过PTL治疗，免疫组化结果显示CD8表达较对照组明显增加，而使用了高浓度靶向脂质体治疗的肿瘤中CD8表达更进一步增加（P<0.01）。结论 小白菊内酯通过诱导细胞程序性坏死、增加肿瘤CD8+T细胞浸润，改善CD8+ T细胞耗竭，其靶向脂质体能提高其抗肿瘤效应。

来源：2023年第10期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2023年第10期