南方医科大学学报

作者：刘 敏, 金 华, 呼 琴, 陈 诺, 张叶青, 王亿平

单位：安徽中医药大学第一临床医学院，安徽 合肥 230000；安徽中医药大学第一附属医院肾病科，安徽 合肥 230000；合肥综合性国家科学中心大健康研究院，新安医学与中医药现代化研究所，安徽 合肥 230000

关键词：miR-23b-5p；Nrf2信号通路；NRK-52E细胞；肾小管EMT；清肾颗粒,

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）诱导NRK-52E（大鼠肾小管上皮细胞）细胞转分化模型中miR-23b-5p是否能对Nrf2通路靶向调节，并阐明清肾颗粒含药血清减轻NRK-52E细胞转分化的机制。方法 构建TGF-β1诱导的NRK-52E细胞转分化模型，分别使用miR-23b-5p mimic、inhibitor以及阴性对照（NC）siRNA转染细胞；采用清肾颗粒含药血清进行干预，分为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组。采用CCK8法测定NRK-52E细胞活性；双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与Nrf2间的靶向关系；Western blot法检测细胞中Nrf2、Keap1、α-SMA蛋白表达；RT-qPCR法检测细胞中miR-23b、Keap1、Nrf2、α-SMA mRNA表达；流式细胞术检测ROS。结果 根据CCK8结果筛选得出清肾颗粒含药血清的最佳浓度和时间分别为20%和24 h，TGF-β1刺激的最佳浓度和时间分别为10 ng/mL和24 h。转染miR-23b-5p mimic 和 inhibitor 发现，当 miR-23b-5p 过表达后，Nrf2 mRNA 表达量也增加；而 miR-23b-5p 表达沉默后，Nrf2mRNA表达量也减少。双荧光素酶报告显示，Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-Nrf2-wt荧光素酶活性（P0.05）。清肾颗粒含药血清的干预实验发现，与正常组比较，TGF-β1组的miR-23b-5p、Nrf2表达降低，Keap1、α-SMA和ROS表达升高（P<0.05）。与TGF-β1组比较，清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS表达降低（P<0.05）；miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。与miR-23b-mimic-NC组比较，miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。与miR-23b-mimic组比较，miR-23b-mimic+清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。结论 清肾颗粒含药血清能通过miR-23b-5p靶向Nrf2通路机制减轻NRK-52E细胞转分化。

来源：2023年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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