南方医科大学学报

作者：于佳池, 李芮冰, 夏 天, 王佳楠, 金家丞, 袁漫秋, 李绵洋

单位：解放军医学院，北京 100853；中国人民解放军总医院第一医学中心检验科，北京 100853；南开大学医学院，天津 300071

关键词：脓毒症；血管内皮细胞；线粒体动力学；PDCD4；炎症,

目的 探究程序性细胞死亡因子4（PDCD4）在缓解脓毒症血管内皮细胞损伤中的作用机制。方法 通过体外分别培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和小鼠血管内皮细胞（C166）并给予脂多糖（LPS）处理，建立脓毒症血管内皮损伤细胞模型。分别设立对照组（NC）、LPS诱导组（NC+LPS）、si-PDCD4转染组（si-PDCD4）、si-PDCD4转染后LPS诱导组（si-PDCD4+LPS）、si-PDCD4转染后LPS诱导加线粒体分裂激动剂（FCCP）组（si-PDCD4+LPS+FCCP）。通过LC-MS/MS技术，分析PDCD4敲低前后蛋白组学变化。通过RT-PCR检测对照组和LPS组转染前后PDCD4、细胞炎症、凋亡以及线粒体分裂融合相关基因的mRNA表达量的变化；蛋白质印迹法检测线粒体分裂融合关键蛋白FIS1、DRP1和OPA1的表达水平；通过激光共聚焦技术观察JC-1、MitoSOX探针荧光强度以检测线粒体膜电位和线粒体活性氧变化。结果 与对照组相比，LPS组炎症相关指标白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和单核细胞趋化蛋白1（MCP1）基因的mRNA表达升高（P<0.05）；PDCD4在脓毒症血管内皮细胞损伤中高表达（P<0.05）；蛋白组学分析结果表明，PDCD4敲低与线粒体动力学存在相关性；Western blot结果表明与对照组相比，LPS组诱导线粒体分裂蛋白FIS1、DRP1表达增加，融合蛋白OPA1减低（P<0.05）；MitoSOX和JC-1荧光探针结果提示LPS诱导下内皮细胞线粒体发生氧化应激，膜电位显著降低（P<0.05），敲减组的氧化应激和线粒体膜电位有所缓解。PDCD4敲减后的保护效应可被线粒体分裂激动剂FCCP逆转。敲减PDCD4后能够抑制LPS所引起的炎症和氧化应激水平，线粒体分裂和融合指标恢复平衡。结论 沉默PDCD4基因通过调控线粒体的动力学维持线粒体功能正常，减轻氧化应激，从而有利于缓解脓毒症血管内皮细胞损伤。

来源：2024年第1期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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