南方医科大学学报

作者：李洋洋, 徐佳佳, 姜诚诚, 陈子龙, 陈 颖, 应梦娇, 王 澳, 马彩云, 王春景, 郭 俣, 刘长青

单位：蚌埠医科大学安徽省神经再生技术与医用新材料工程研究中心，生命科学学院，安徽 蚌埠 233000

关键词：人诱导多能干细胞；Y27632；原始神经上皮细胞；多巴胺能神经前体细胞,

目的 提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞（hiPSCs-NECs）定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞（DAPs）的效率。方法 将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1（10 μmol/L）、SB431542（10 μmol/L）、音猬因子（SHH 200 ng/mL）、成纤维细胞生长因8（FGF8 100 ng/mL）、嘌吗啡胺（2 μmol/L）、CHIR99021（3 μmol/L）、N2（1%）]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d，细胞分化为原始神经上皮细胞（NECs）。特异性诱导DAPs，将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后，在神经分化培养基[添加 1%N2、2%B27-A、BDNF（10 ng/mL）、GDNF（10 ng/mL）、AA、TGF-β、cAMP、1% GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种，并于次日更换培养基去除Y27632，持续诱导至第28天获得DAPs。结果 人iPSCs可在基质胶上稳定传代，表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1，且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NECs，形成玫瑰花结样结构，能够表达特征性标记物（SOX2、Nestin和PAX6）。将hiPSCs-NECs消化后，添加5 μmol/L Y27632的hiPSCs-NECs相比较未加Y27632的对照组，细胞解离后贴壁存活率明显增加，处于S期的细胞（P<0.01）与细胞活力显著提高（P<0.01），且凋亡率显著降低（P<0.05），持续诱导至第28天，细胞高表达DAPs特异性的标记物（TH、FOXA2、NURR1和Tuj1）。结论 添加Y27632（5 μmol/L）24 h可显著提高人iPSCs-NECs细胞向iPSCs-DA神经前体转化时的细胞存活率，并且Y27632去除后，不会影响后续向DA神经前体细胞分化，间接的提高了细胞的分化效率。

来源：2024年第2期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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