南方医科大学学报

作者：陈光亚, 向星亮, 曾兆祥, 黄荣增, 金姝娜, 肖明中, 宋成武

单位：1.湖北中医药大学，药学院，湖北 武汉 430065；3.湖北中医药大学，基础医学院，湖北 武汉 430065；6.湖北中医药大学，肝脏疾病中医药现代化研究中心，湖北 武汉 430065；2.鄂州市中心医院药学部，湖北 鄂州 436000；4.湖北省中医院肝病研究所，湖北 武汉 430000；5.湖北时珍实验室，湖北 武汉 430065

关键词：地五养肝方,循环外泌体,液质联用,溶血甘油磷脂,非酒精性脂肪肝,

基金：湖北省中医药管理局中医药青年人才项目(ZY2023Q040)

目的 研究地五养肝方对非酒精性脂肪肝（NAFLD）小鼠循环外泌体溶血甘油磷脂（Lyso-GPLs）的调控作用。 方法 采用尺寸排阻色谱法分离血液中循环外泌体，运用透射电镜观察外泌体的外观、粒径仪检测外泌体直径分布、Western blotting法检测外泌体表面特异性蛋白CD9，CD63及TSG101的表达；将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、模型组和复方给药组，8只/组，正常组给予标准饲料，模型组和复方给药组饲喂高脂饲料，喂养1周后，各给药组小鼠按剂量给予地五养肝胶囊内容物，正常组和模型组给予等量生理盐水，灌胃给药4周。末次给药后，各小鼠麻醉后取血分离血清，检测总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST），观察其对NAFLD的改善作用并提取血清中循环外泌体；同时，结合多元统计分析，筛选NAFLD小鼠循环外泌体中Lyso-GPLs类成分生物标志物，观察地五养肝方对标志物的调控作用。 结果 透射电镜结果显示外泌体大小在100 nm左右，形状为典型的具有清晰双层膜的茶托样结构；粒径结果显示循环外泌体粒径分布均匀，平均粒径为137.5 nm；Western blotting检测结果表明外泌体表面特异性蛋白CD9， CD63及TSG101的存在；模型组小鼠血清中TC、HDL-C、LDL-C和AST水平显著高于正常组（P<0.01），经地五养肝方治疗后，TC、LDL-C、AST、ALT水平显著回调（P<0.01），并筛选出43个经地五养肝方治疗后呈现显著回调趋势（P<0.01）的Lyso-GPLs标志物成分。 结论 地五养肝方防治NAFLD的作用机制涉及对循坏外泌体溶血甘油磷脂的改善和调控作用，为其防治慢性肝病的作用机制研究提供了新的科学视角。

来源：2024年第7期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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