南方医科大学学报

作者：郑孟冬, 刘妍, 刘娇娇, 康巧珍, 王婷

单位：郑州大学生命科学学院，河南 郑州 450000

关键词：蛋白4.1R,肝细胞,增殖与凋亡,糖酵解,

基金：国家自然科学基金(81870093)

目的 探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响，并初步阐明其分子机制。 方法 以肝细胞株HL-7702为材料，利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R-/- HL-7702细胞株。设置对照组为正常培养的4.1R+/+ HL-7702细胞，实验组为4.1R-/- HL-7702细胞。细胞在培养24、48以及72 h时，分别用CCK-8及EdU-488染色，然后利用酶标仪以及流式细胞术检测细胞的增殖能力。细胞经Annexin V-FITC/PI染色后，流式细胞术检测HL-7702细胞在培养24、48以及72 h时的凋亡水平。利用生化试剂盒分别检测HL-7702细胞葡萄糖摄取量、乳酸分泌量以及ATP生成的变化。pH计检测培养48 h HL-7702细胞上清培养基的pH值。qRT-PCR检测HL-7702细胞糖酵解过程关键调节酶HK2、PFKL、PKM2以及LDHA的mRNA表达量。Western blotting检测AMPK、p-AMPK、Raptor以及p-Raptor的蛋白表达量。 结果 Western blotting以及基因测序结果表明4.1R-/- HL-7702细胞株构建成功。与对照组相比，4.1R-/-组的CCK-8和EdU-488实验结果均显示HL-7702细胞的增殖能力降低；细胞凋亡实验结果表明，4.1R-/- HL-7702细胞凋亡水平升高。蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞葡萄糖摄取量（P<0.05）、乳酸分泌量（P<0.001）、ATP生成（P<0.001）下降，细胞上清培养基pH值（P<0.01）升高。qRT-PCR实验结果表明糖酵解过程关键调节酶的mRNA表达量均下降（P<0.001）。相较于HL-7702细胞，4.1R-/- HL-7702细胞的AMPK和Raptor蛋白表达量下降，p-AMPK和p-Raptor蛋白表达量升高。 结论 蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞增殖能力降低、凋亡水平增加，糖酵解过程被抑制，其调控机制与下游AMPK-mTORC1信号通路的激活密切相关。

来源：2024年第7期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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