南方医科大学学报

作者：戴荣, 曹泽平, 刘传娇, 葛永, 程梦, 王伟丽, 陈义珍, 张磊, 王亿平

单位：1.安徽中医药大学第一附属医院肾内科，安徽 合肥 230031；2.安徽中医药大学第一临床医学院，安徽 合肥 230038

关键词：清肾颗粒,外泌体,miR-330-3p,肾纤维化,

基金：国家自然科学基金(82274307);合肥市科技局生命健康专项(GJ2022SM03);2022临床医学研究转化专项(202104j07020014);安徽省自然科学基金面上项目(2308085MH292);安徽省高等学校科学研究重点项目(2023AH050749);2023年度合肥综合性国家科学中心大健康研究院新安医学与中医药现代化研究所科研项目(2023CXMMTCM018)

目的 探讨清肾颗粒对腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型及尿酸刺激下NRK-49F细胞的作用及其调控外泌体、miR-330-3p和CREBBP的机制。 方法 动物实验：构建腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型，分为正常组、模型组和清肾颗粒组（8.0 g·kg-1·d-1），6只/组，灌胃12周。采用尾静脉注射腺相关病毒载体，实验结束后收集双侧肾组织。观察小鼠肾组织外泌体标记蛋白CD9，Hsp70，TSG101蛋白水平变化；Western blotting及免疫荧光检测小鼠肾组织Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化；HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理学变化。细胞实验：构建尿酸刺激下的NRK-49F细胞模型（尿酸400 μmol/L，SD大鼠灌胃制备清肾颗粒含药血清用于细胞实验，分为正常组、模型组和清肾颗粒含药血清组。观察NRK-49F细胞中外泌体标记蛋白CD9，Hsp70，TSG101蛋白水平变化；Western blotting及免疫荧光检测NRK-49F细胞中Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化；双荧光素酶报告基因检测miR-330-3p与CREBBP靶向关系；RT-qPCR和Western blotting检测NRK-49F细胞中miR-330-3p与CREBBP表达变化。 结果 动物实验中，Western blotting结果显示，与正常组相比，模型组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平升高（P<0.05）；与模型组相比，清肾颗粒组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平降低（P<0.05）。Western blotting及免疫荧光结果显示，与正常组相比，模型组Col-III、α-SMA、FN表达增加，E-cad表达减少（P<0.05）；与模型组相比，清肾颗粒组Col-III、α-SMA、FN表达减少，E-cad表达增加（P<0.05）。肾脏病理检查显示，清肾颗粒可以明显减轻小鼠肾组织纤维化（P<0.05）。RT-qPCR结果显示，尾静脉注射腺相关病毒病毒载体抑制miR-330-3p表达，增加CREBBP水平，减轻肾纤维化（P<0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示，CREBBP是miR-330-3p的靶点（P<0.05）。RT-qPCR和Western blotting结果显示，与正常组相比，模型组miR-330-3p表达增加，CREBBP表达减少（P<0.05）；与模型组相比，清肾颗粒组miR-330-3p表达减少，CREBBP表达增加（P<0.05）。细胞实验结果与动物实验结果趋势一致。 结论 清肾颗粒通过干预外泌体，降低miR-330-3p水平，增加CREBBP表达抑制肾纤维化。

来源：2024年第8期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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