南方医科大学学报

作者：周智锋, 柳硕岩, 李洁羽, 陈明秋, 林辉, 陈宇杰, 陈伟杰, 林军鹏, 周航, 郑庆丰

单位：1.福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院，肿瘤免疫研究室，福建 福州 350014；2.福建医科大学基础医学院，福建 福州 350100；3.福建省肿瘤转化医学重点实验室，福建 福州 350014；4.福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院，胸部外科，福建 福州 350014；5.福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院，胸部肿瘤放疗科，福建 福州 350014

关键词：肺癌,NKP30,嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞,IL-21,CCL19,

基金：国家自然科学基金(82173051);福建省自然科学基金(2022J01426);福建省科技创新联合资金项目(2023Y9407);福建省肿瘤医院院内课题(2023YN07)

目的 探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。 方法 在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR；CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激；流式细胞术检测免疫细胞表型；迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用；乳酸脱氢酶（LDH）及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力；酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测IFN-γ的分泌数量；ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况；体内实验中，将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊，构建斑马鱼移植瘤模型，24 h后将免疫细胞注射至同样部位，体式荧光显微镜拍摄荧光。 结果 NKP30配体（B7H6）在正常组织及血液细胞不表达，在肺癌细胞上高表达（90%以上）。IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比，具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成（P<0.001），免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低（P<0.005），对肺癌细胞具有更强的杀伤能力（P<0.001），伴随IFN-γ数量明显增加（P<0.001）。IL-21-CCL19 CAR-T 细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL‑21 （3152.33±526.74 pg/mL）和趋化因子CCL19（1853±211.95 pg/mL）。体内实验中，CAR-T细胞和普通T细胞比较，具有较强的杀伤能力和增殖能力，但2种CAR-T细胞无明显差异（P>0.05）。 结论 IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部，有效杀伤肿瘤细胞，同时产生更多的记忆T细胞。

来源：2024年第10期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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