南方医科大学学报

作者：银苗朱, 陈奎玉, 吴丽敏, 江鹏宇, 籍志慧, 张念, 周欢, 韩辉

单位：1.安徽中医药大学第一附属医院脑病中心，安徽 合肥 230031；2.中国科学技术大学生命科学与医学部，安徽 合肥 230001；3.中国科学技术大学附属第一医院生殖与遗传分院，安徽 合肥 230001

关键词：Wilson病,肝豆补肾汤,铜沉积,ERK信号通路,精子发生,

基金：国家自然科学基金(82374212);安徽省科技厅临床专项转化项目(202204295107020044);安徽省教育厅重点项目(2022AH050523)

目的 探究肝豆补肾汤（GDBSD）影响Wilson病（WD）模型TX雄性小鼠生殖障碍的机制。 方法 以15只正常雄性DL小鼠为对照组，将60只纯合雄性TX小鼠随机分为4组（n=15）：WD模型组、青霉胺组、GDBSD组和GDBSD+U0126组（U0126为一种特异性MAPK/ERK激酶抑制剂），其中青霉胺组给予0.09 g/kg青霉胺药液灌胃；GDBSD组给予GDBSD药液灌胃，0.2 mL/（10 g·d）；GDBSD+U0126组给予同样GDBSD灌胃另外每日下午同一时间腹腔注射U0126（20 mg/kg）。干预4周后检测各组睾丸组织铜含量；利用HE染色法观察小鼠睾丸与附睾的深层次病理结构及精子构造，通过电子显微镜技术探究睾丸中生精细胞与精子的超微结构特点；TUNEL法标记睾丸组织凋亡细胞；免疫印迹检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、细胞色素C（Cytc）、半胱天冬蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞外信号调节激酶（ERK）和磷酸化激活的细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白表达；免疫组化标记Brdu阳性细胞；精液质量检测精子密度、活力及畸形率。通过雌鼠的妊娠率和产仔数评估雄性TX小鼠的生育力水平。 结果 与WD模型组相比，青霉胺组、GDBSD组改善了小鼠的睾丸的组织和细胞病理学变化以及精子密度、活力程度和畸形率和生育力水平，并增加了睾丸JOHNSEN评分（P<0.05）；Cytc、Caspase-3蛋白表达水平下调，Bcl-2表达上调（P<0.05），GDBSD+U0126组逆转了GDBSD治疗后Bcl-2表达的上调（P<0.05）；ERK1/2信号通路研究结果显示，5组之间ERK1/2总蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比，WD模型组p-ERK蛋白表达含量明显减少；与WD模型组相比，青霉胺组、GDBSD组p-ERK蛋白表达含量增加；GDBSD+U0126组p-ERK蛋白表达含量低于GDBSD组（P<0.05）；在施用U0126后，生精细胞增殖减少，生精细胞凋亡数量增加（P<0.05）。 结论 GDBSD可以改善Wilson病模型TX小鼠异常精子发生和生育力下降，其机制可能通过激活ERK信号通路从而改善生精细胞的增殖和凋亡状况。

来源：2024年第11期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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