南方医科大学学报

作者：钟彦鑫, 刘宇, 童未来, 谢新生, 聂江波, 杨枫, 刘志礼, 刘家明

单位：1.南昌大学第一附属医院，骨科，江西 南昌 330006；3.南昌大学第一附属医院，医学研究公共服务中心，江西 南昌 330006；2.脊柱脊髓系统疾病江西省重点实验室，江西 南昌 330006

关键词：骨肉瘤,AURKB,DHX9,磷酸化,

基金：江西省“双千计划”首批培养类项目;江西省自然科学基金(20192ACBL21041)

目的 探讨AURKB在促进骨肉瘤细胞恶性表型中的具体调控机制。 方法 分别转染HA-Vector和HA-AURKB于293T细胞中，采用免疫沉淀结合液相色谱-串联质谱技术筛选AURKB的潜在互作分子，免疫共沉淀和Western blotting验证其互作分子。通过RNA干扰技术，干扰骨肉瘤细胞中AURKB的表达；设置对照组：转染对照组慢病毒143B细胞，sh-AURKB组：转染干扰AURKB慢病毒143B细胞，sh-con+Flag-DHX9组：对照组转染过表达DHX9慢病毒，sh-AURKB+Flag-DHX9组：沉默AURKB组转染过表达DHX9慢病毒。采用EDU、Transwell实验分别观测细胞的增殖、迁移和侵袭活性。机制分析采用Co-IP、体内泛素化实验等检测AURKB和DHX9的相互作用、DHX9磷酸化水平、DHX9泛素化水平。Western blotting检测AURKB及DHX9对NF-κB的信号激活作用。 结果 AURKB在骨肉瘤细胞系高表达。沉默骨肉瘤143B细胞中AURKB的表达，细胞增殖、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。而AURKB与DHX9存在相互作用，且AURKB及DHX9在骨肉瘤组织中均高表达，沉默AURKB能够降低DHX9的蛋白表达，过表达AURKB后DHX9磷酸化水平升高（P<0.05）。沉默AURKB后不影响DHX9的转录翻译，但可以加快DHX9降解速度及增加DHX9泛素化水平。此外，过表达DHX9可以逆转沉默AURKB对IKBα蛋白及磷酸化p65的影响，促进p65入核激活NF-κB信号通路，并且增强了骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。 结论 AURKB通过调控DHX9激活NF-κB信号通路，促进骨肉瘤细胞恶性表型。

来源：2024年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2024年第12期