南方医科大学学报

作者：展俊平, 黄硕, 孟庆良, 范围, 谷慧敏, 崔家康, 王慧莲

单位：1.河南省中医院//河南中医药大学第二附属医院风湿科，河南 郑州 450002；2.河南中医药大学骨伤学院，河南 郑州 450008

关键词：低氧,补阳还五汤,类风湿关节炎,滑膜成纤维细胞,BNIP3-PI3K/Akt,线粒体自噬,

基金：河南省高等学校重点科研项目计划(22B360006);河南省中医药科学研究专项课题(2019ZY2060);河南省卫生健康委员会中医药拔尖人才培养项目资助(豫卫中医函[2021]15号)

目的 在低氧微环境下，以BNIP3-PI3K/Akt信号通路为核心，研究补阳还五汤参与FLS-RA线粒体自噬的调控机制。 方法 将成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养，分为正常对照组（FLS-RA正常培养）、模型对照组（IL-1β诱导）、补阳还五汤含药血清低、中、高干预组（IL-1β诱导+浓度分别为5%、10%、20%含药血清），除正常对照组外，其余组细胞按照10% O2浓度低氧处理。AnnexinV-APC/7-AAD双染测定细胞凋亡和T-AOC试剂盒检测细胞总抗氧化能力。探针分子测定细胞ROS，ATP试剂盒测定细胞ATP水平、线粒体膜电位（Δψm）、细胞Ca2+平衡稳态的变化。Western blotting法检测BNIP3、PI3K、AKT蛋白表达水平，RT-q PCR法检测BNIP3、PI3K、AKT及自噬相关因子LC3、Beclin-1、P62 mRNA 的表达。 结果 补阳还五汤组能够降低细胞的凋亡百分比（P<0.05），且呈浓度依赖性。补阳还五汤组总抗氧化力降低，T-AOC浓度（U/mL）降低，ROS产生增加。观察到自噬小体的形成，ATP 酶水平释放量增加（P<0.05）；线粒体膜电位、Ca2+水平均呈下降趋势。补阳还五汤组BNIP3蛋白表达升高，PI3K、AKT表达降低；与模型组相比，补阳还五汤组BNIP3、P62、mRNA表达升高（P<0.05）；PI3K、AKT、LC3、Beclin-1、mRNA表达降低，Beclin-1的表达差异无统计学意义（P>0.05）；LC3的表达仅在中药小剂量组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 在低氧环境下，补阳还五汤可能通过抑制BNIP3介导的PI3K/AKT通路，从而抑制了自噬因子的表达。

来源：2025年第1期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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