南方医科大学学报

作者：莫艳秀, 舒洋, 莫钰兰, 刘峻彤, 徐欧欧, 邓华菲, 王岐本

单位：1.湘南学院基础医学院，湖南 郴州 423000；2.湘南学院附属医院检验科，湖南 郴州 423000；3.上海健康医学院药学院，上海 201318

关键词：CRISPR/Cas9,CDC20,宫颈癌,Wnt/β-Catenin,

基金：湖南省教育厅资助科研项目(23A0589);湘南学院高层次人才科研启动基金项目(2021-A20);湖南省大学生创新训练计划项目（湘教通〔2024〕191号,4854）

目的 探讨细胞分裂周期蛋白20（CDC20）在宫颈癌中的功能及其对宫颈癌C33A细胞增殖、迁移以及侵袭的影响和作用机制。 方法 TCGA数据库分析CDC20在宫颈癌组织中的表达情况，免疫组化（IHC）检测宫颈癌组织与癌旁组织中的CDC20和β-Catenin蛋白表达水平。利用CRISPR/Cas9设计CDC20基因双靶点的sgRNA2＆7序列，构建重组质粒并测序验证。将宫颈癌细胞C33A按转染的质粒不同分为sgRNA-NC组和sgRNA-CDC20组，通过qRT-PCR和Western blotting检测CDC20的mRNA和蛋白表达水平，平板克隆检测其增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力。将2组C33A细胞分别接种于裸鼠（5只/组）双侧腋下左、右两侧，定期监测肿瘤体积并绘制其生长曲线，称取裸鼠体质量并脱臼处死。Western blotting分别检测细胞和瘤体组织中的CDC20和 β-Catenin蛋白的表达水平；免疫共沉淀（CoIP）和免疫荧光共定位验证CDC20与β-Catenin的相互作用。 结果 CDC20和β-Catenin在宫颈癌组织中的表达高于癌旁组织（P<0.001）。体外细胞实验结果显示：与sgRNA-NC组细胞比较，sgRNA-CDC20敲除株的细胞增殖能力下降（P<0.001）且细胞凋亡显著升高（P<0.01）；迁移和侵袭能力受到明显抑制（P<0.05）。体内动物实验结果显示：与sgRNA-NC组比较，sgRNA-CDC20组的瘤体体积生长曲线明显减小（P<0.05），但裸鼠体质量无明显变化（P>0.05）；sgRNA-CDC20组中的细胞和组织中的CDC20和β-Catenin的蛋白水平明显降低（P<0.05），免疫共沉淀（CoIP）和免疫荧光验证CDC20和β-Catenin存在相关性。 结论 CDC20在宫颈癌组织、细胞以及瘤体中的表达明显升高，敲除CDC20可明显抑制C33A细胞的增殖和侵袭转移能力，并促进凋亡，其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路密切相关。

来源：2025年第6期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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