南方医科大学学报

作者：王静娴, 任自敬, 周佩洋

单位：湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院神经内科，湖北 襄阳 441000

关键词：鞘氨醇1-磷酸受体5,血脑屏障功能障碍,氧化应激,氧糖剥夺/复氧复糖损伤,

基金：湖北省自然科学基金(2021CFB567);湖北医药学院研究生创新项目(YC2023048)

目的 探讨鞘氨醇1-磷酸受体5（S1PR5）对氧糖剥夺及复氧复糖（OGD/R）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响及相关机制。 方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3，使用OGD/R诱导屏障功能障碍，分别使用S1PR5特异性激动剂A971432、敲低S1PR5的siRNA及过表达S1PR5的慢病毒进行干预。设置对照组：bEnd.3正常培养；OGD/R组：bEnd.3进行OGD/R；A971432组：OGD/R组+A971432；siNC组：转染siNC+OGD/R；siS1PR5组：转染siS1PR5+OGD/R；OE NC组：感染慢病毒LV5-NC+OGD/R；OE S1PR5组：感染慢病毒LV5-S1PR5+OGD/R。RT-qPCR法分别检测敲低或过表达S1PR5的效率；采用CCK-8检测在不同培养条件下bEnd.3细胞的活力；采用FITC-dextran渗透法检测内皮屏障渗透性；采用细胞免疫荧光法检测蛋白的定位及表达；DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平；Western blotting法检测蛋白的表达水平。 结果 CCK-8结果显示激动S1PR5可以增加OGD/R下调的细胞活力（P<0.0001），FITC-dextran渗透法结果显示激动和过表达S1PR5可减少FITC-dextran的渗漏（P<0.001），而敲低S1PR5增加FITC-dextran的渗漏（P<0.001）。Western blotting及免疫荧光结果显示，与OGD/R组相比，激动和过表达S1PR5可以增加屏障蛋白ZO-1（P<0.05）、Occludin（P<0.05）的表达，而敲低S1PR5会下调ZO-1和Occludin（P<0.05）的表达。ROS检测结果显示，激动和过表达S1PR5能减少ROS的产生，而敲低S1PR5会增加ROS产生。Western blotting检测发现过表达S1PR5可以增加抗氧化蛋白Nrf2（P<0.0001）、HO-1（P<0.0001）、SOD2（P<0.01）的表达。 结论 S1PR5受体的激动剂干预及基因过表达可显著改善OGD/R模型诱导的活力减少及通透性增加，而基因敲低S1PR5则加剧OGD/R诱导的功能损伤，其机制可能与减少ROS，上调抗氧化蛋白表达相关。

来源：2025年第7期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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