南方医科大学学报

作者：尚读, 李雯, 崔立华, 陈明

单位：1.天津中医药大学研究生院，天津 301617；2.河南省商丘市妇幼保健院，河南 商丘 476000；3.天津市南开医院中西医结合急腹症研究所，天津 300100；4.天津市中西医结合医院（天津市南开医院）消化内科，天津 300100

关键词：护肝汤,非酒精性脂肪性肝病,网络药理学,脂质代谢,AMPK/m-TOR,

基金：天津市卫生健康委中医、中西医结合科研项目(2023045);天津市中医药重点领域科研项目(2024019);天津市教委科研计划项目(2024ZD045)

目的 基于网络药理学探究护肝汤（HGT）治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的作用原理，并进行体内及体外实验验证。 方法 采用网络药理学分析预测HGT抗NAFLD的有效成分及潜在靶点，利用STRING数据库构建蛋白相互作用（PPI）网络并筛选核心靶点，同时运用Metascape数据库对潜在靶点进行GO和KEGG富集分析。最后，为进一步验证网络药理学预测结果，本研究通过构建高脂饮食（HFD）诱导NAFLD大鼠模型以及通过游离脂肪酸（FFA）诱导HepG2细胞模型进行实验验证。动物实验：取56只大鼠随机分为空白对照组（8只）、空白+中药高剂量组（8只）和造模组（40只），采用HFD建立NAFLD模型。将造模组大鼠随机分为模型组、西药对照组和中药低、中、高剂量组（各8只），分别予以生理盐水10 mL/kg、水飞蓟素100 mg/kg以及HGT 5.13、10.26、20.52 g/kg灌胃，连续10周。末次给药后通过全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、低密度脂蛋白（LDL）、乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）水平，并进行肝脏组织病理学检测，RT-qPCR 法检测肝脏中乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）、脂肪酸合成酶（FASN）、AMPK、m-TOR的mRNA表达，Western blotting法检测ACC1、FASN、p-AMPK、p-mTOR的蛋白表达。细胞实验：体外培养HepG2细胞，分别设置空白组（溶剂对照）、FFA（0.5、1、2、4 mmol/L）处理组、对照血清（CONs）和HGT含药血清（HGTs）（5%、10%、20%）处理组、AMPK抑制剂（Compound C）及mTOR激活剂（MHY1485）处理组，通过CCK-8实验检测细胞活力，油红O染色试剂盒检测各组细胞脂质蓄积，并测定各组细胞TC、TG水平，RT-qPCR 法检测细胞中ACC1、FASN、AMPK、m-TOR的mRNA表达，Western blotting法检测ACC1、FASN、p-AMPK、p-mTOR的蛋白表达，从而验证潜在治疗机制。 结果 研究共筛选出HGT的活性成分130个，与NAFLD共同靶点267个，PPI网络分析后筛选出核心基因节点53个，其中近一半都参与了脂质代谢；并且HGT治疗NAFLD与脂质与动脉粥样硬化信号通路、胰岛素抵抗信号通路、AMPK信号通路等相关信号通路关系密切。实验验证结果表明，HGT能够减轻NAFLD大鼠的肝损伤及脂质积累，并抑制ACC1和FASN mRNA和蛋白的表达（P<0.05）；不同浓度的HGTs能够降低FFA诱导HepG2细胞中TG、TC水平，抑制ACC1、FASN mRNA和蛋白的表达（P<0.05）；体内外实验结果均显示HGT可激活AMPK/m-TOR信号通路，促进p-AMPK表达，抑制p-mTOR表达（P<0.05）；加入Compound C及MHY1485后，HGTs对p-AMPK、p-mTOR、ACC1、FASN的调节作用受到不同程度的影响（P<0.05）。 结论 HGT能够通过激活AMPK/m-TOR信号通路，减少脂质合成，从而减轻NAFLD的严重程度。

来源：2025年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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