南方医科大学学报

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• miR-24-3p靶向GSK-3β抑制铁死亡促进大鼠脊髓损伤修复

  魏栋敏, 王冰冰, 高建忠, 翟天宇, 白心悦, 朱晶惠, 张灿, 施彩珍, 郝琴, 陈晨, 赵琳

  目的 探讨miR-24-3p促进大鼠脊髓损伤（SCI）修复的分子机制。 方法 构建SD大鼠SCI模型，通过qRT-PCR检测SCI后miR-24-3p的表达变化。采用立体定位仪，通过尖端固定有毛细玻璃管的微量注射器于SCI头、尾各3 mm处注射miR-24-3p agomir或阴性对照agomir。使用BBB评分评估SCI大鼠运动功能恢复情况，HE染色观察脊髓组织形态学改变，试剂盒检测SCI区域Fe2+含量，普鲁士蓝+DAB染色检测SCI区域铁沉积变化。采用Western blotting和免疫荧光染色检测SCI区域组织GSK-3β及铁死亡相关蛋白xCT、GPX4的表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-24-3p与GSK-3β的靶向关系。体外构建Erastin诱导的PC12细胞铁死亡模型，检测MDA含量变化， Western blotting和免疫荧光染色检测细胞内GSK-3β、xCT和GPX4的蛋白表达水平变化。 结果 在SD大鼠SCI模型中，SCI区域miR-24-3p、xCT和GPX4蛋白表达在损伤后显著降低（P<0.05）。给予miR-24-3p agomir干预后，SCI大鼠后肢运动功能明显恢复，脊髓组织病理形态得到改善，Fe2+含量及铁沉积减少，GSK-3β蛋白表达降低，xCT和GPX4蛋白表达增加（P<0.05）。双荧光素酶报告实验证实miR-24-3p与GSK-3β之间存在靶向关系并抑制GSK-3β的表达。PC12细胞铁死亡模型中，转染miR-24-3p mimics可显著降低细胞内MDA含量和GSK-3β蛋白表达水平，并升高xCT和GPX4的蛋白表达水平；联合转染GSK-3β抑制剂后，上述效应进一步增强。 结论 miR-24-3p通过抑制GSK-3β抑制铁死亡，从而促进大鼠SCI的修复。

• 加味清心莲子饮通过调控KDM3C/SP1信号通路改善糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤

  谢家润, 罗燕玉, 夏金金, 王明

  目的 探讨加味清心莲子饮（QISD）对糖尿病肾病（DKD）小鼠肾脏损伤的干预作用及机制。 方法 从GEO数据库中下载GSE193192数据集，筛选由晚期糖基化终末产物诱导的肾小管上皮细胞（HK-2）中差异表达的免疫基因集，利用多种分析预测药理机制。动物实验方面，选用雄性ICR小鼠，先持续性高脂饮食喂养4周后，连续腹腔注射链脲佐菌素5 d，制备DKD模型，连续灌胃低（14.46 g/kg）、中（28.92 g/kg）、高剂量（57.84 g/kg）的加味清心莲子饮12周（1次/6），以达格列净作为阳性对照，8只/组。通过HE、PAS和Masson染色观察DKD小鼠肾脏病理损伤。通过RT-qPCR和Western blotting检测KDM3C、SP1、TNF-α、MCP-1等蛋白的表达水平。在体外实验中，使用脂多糖（LPS）诱导HK-2发生炎症损伤，采用小分子抑制剂干预的方法，探索加味清心莲子饮对细胞炎性损伤的影响。 结果 动物实验结果表明，加味清心莲子饮中剂量组和高剂量组能够显著降低糖尿病肾病小鼠糖化血清蛋白、肌酐和尿素氮水平（P<0.01，P<0.001），减少糖原累积，减轻肾小球肥大，降低炎性细胞浸润。此外，加味清心莲子饮中剂量组和高剂量组能够显著降低小鼠肾脏组织中KDM3C、SP1、TNF-α和MCP-1的基因和蛋白表达（P<0.05，P<0.01，P<0.001）。细胞实验结果显示KDM3C抑制剂JIB-04的应用则能抑制TNF-α、MCP-1和ICAM-1等炎性因子的表达水平（P<0.05，P<0.001）。 结论 加味清心莲子饮可通过抑制糖尿病肾病小鼠的炎症反应改善肾脏损伤，其作用机制可能与抑制KDM3C/SP1信号通路的过度激活有关。

• 长链非编码RNA LASTR通过结合miR-4476上调BCAM表达促进头颈鳞癌恶性进展

  吴博, 宋茹, 高宁, 邢可尧, 张鹏辉, 屈沫怡, 张慧敏

  目的 探讨长链非编码RNA LASTR在头颈鳞癌细胞中的调控作用、分子机制及临床意义。 方法 利用TCGA、GEO数据库转录组测序数据分析LASTR在头颈鳞癌中的表达水平及其与患者生存时间的相关性，qPCR检测LASTR在头颈鳞癌细胞和正常对照细胞中的表达水平。利用siRNA建立LASTR敲降的头颈鳞癌细胞模型，通过高内涵细胞计数、CCK-8实验、ATP检测分析增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。生物信息学分析LASTR候选靶基因并进行功能注释，qPCR和免疫印迹验证LASTR对候选靶基因BCAM的调控作用。RNA pulldown和双荧光素酶报告分析研究LASTR对BCAM的调控机制。利用TCGA和GEO转录组数据分析BCAM在头颈鳞癌中的表达水平，细胞功能实验研究BCAM对头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。挽救实验探究LASTR是否通过调控BCAM表达水平影响头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 结果 与正常对照相比，头颈鳞癌组织和细胞中LASTR表达水平升高（P<0.01）。LASTR高表达与头颈鳞癌预后不良显著相关（P<0.05）。敲降LASTR抑制头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力（P<0.01）；生物信息学分析发现78个LASTR候选靶基因，这些基因主要富集于血管生成、低氧应答、血管内皮生长因子受体信号通路、细胞群增殖的正向调节、MAPK信号通路、ErbB信号通路、Ras信号通路等生物过程和信号通路；敲降LASTR导致头颈鳞癌细胞BCAM表达水平降低（P<0.01）；机制研究揭示LASTR通过特异性结合miR-4476上调靶基因BCAM表达水平。敲降BCAM抑制头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，而过表达BCAM能够逆转敲降LASTR对头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。 结论 LASTR在头颈鳞癌组织和细胞中表达水平上调，且LASTR高表达与头颈鳞癌预后不良相关。LASTR通过特异性结合miR-4476上调BCAM表达水平，从而促进头颈鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。本研究结果将为头颈鳞癌临床诊疗提供新的潜在标志物。

• 有氧运动通过氧化应激-炎症-Hippo/YAP通路轴改善心力衰竭小鼠心功能

  张国栋, 魏思昂, 王弘, 谢艳丽, 何晖, 李嵘

  目的 探讨有氧运动通过调控氧化应激、炎症与Hippo-YAP信号通路改善主动脉弓缩窄（TAC）诱导心力衰竭的作用机制。 方法 30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组（Sham）、TAC模型组（TAC）及TAC+有氧运动组（TACE），10只/组。TACE组进行4周跑台有氧训练（强度递增）。干预后采用超声心动图评估心功能，Masson染色观察心肌纤维化，ELISA检测血清BNP、炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）及氧化应激指标（MDA、SOD、GSH-Px）。RT‑PCR与Western blotting分别检测心肌组织Hippo‑YAP通路相关基因及蛋白表达。通过生物信息学分析各指标相关性。 结果 与TAC组相比，TACE组心脏质量与心质量指数降低（P<0.01），左心室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）及E/A比值升高（P<0.05），心肌纤维化减轻（P<0.05），血清与心肌BNP表达下降（P<0.05）。TACE组血清TNF‑α、IL‑6、IL‑1β及MDA水平降低（P<0.05），SOD与GSH‑Px活性升高（P<0.05）。RT‑PCR结果显示，TACE组心肌Mst1、Lats1、Lats2及YAP1 mRNA表达较TAC组下调（P<0.05）。Western blotting结果显示，TACE组心肌Mst1/2、Lats1/2及YAP总蛋白表达降低，而p‑Lats1/2与p‑YAP水平升高（P<0.05）。相关性分析提示氧化应激、炎症指标与Hippo‑YAP通路表达显著相关。 结论 有氧运动可改善TAC诱导的心力衰竭小鼠心功能，减轻心肌肥厚与纤维化，其保护作用可能与抑制氧化应激、炎症反应及调控Hippo‑YAP信号通路有关。

• 老年患者全麻期间颈总动脉血流的动态变化及其生理调控机制：一项前瞻性研究

  刘星扬, 吴静涵, 叶春艳, 王锷, 胡浩

  目的 颈动脉血流减少与围术期脑血管及神经系统并发症密切相关，但其在全身麻醉期间的变化规律及生理调控因素仍缺乏系统认识。 方法 前瞻性纳入193例接受腹部手术的老年患者，连续记录围术期呼吸、循环参数及麻醉深度指标。采用矢量血流成像技术在多个关键时间点测量颈总动脉（CCA）血流量。将心率、平均动脉压、呼气末二氧化碳及双频指数纳入线性混合效应模型，并以患者作为随机效应，分析并解释术中CCA血流变化的生理决定因素。 结果 老年患者在全身麻醉期间CCA血流呈现明显的阶段性波动。线性混合效应模型可解释术中CCA血流变异的52.0%（调整后R²=0.520，P<0.001）。心率、平均动脉压、呼气末二氧化碳及双频指数均与颈动脉血流变化显著相关（P<0.001）。标准化模型进一步显示，不同生理指标对CCA血流的调节强度存在明显差异，其中血流动力学相关指标的影响高于血压或心率变化。手术方式及手术体位对颈动脉血流无显著影响。 结论 本研究从整体生理调控角度表明，术中脑灌注并非单纯依赖血压维持，而是受到通气水平、循环状态及麻醉深度的协同调控。有效识别和管理相关影响因素有助于优化术中脑灌注。

• 全球非酒精性脂肪性肝病负担的关键决定因素：基于GBD数据的机器学习联合孟德尔随机化验证

  陈浩, 李振汉, 纪梦佳, 汪鑫诚, 陈博峰, 管谦, 武嫚, 卢林明

  目的 分析非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的全球负担趋势、驱动因素及健康不平等，利用可解释机器学习识别关键死亡风险因素，并通过孟德尔随机化验证其潜在因果关联。 方法 基于全球疾病负担（GBD）2021数据，提取1990~2021年NAFLD的发病率、患病率、死亡率、残疾调整生命年（DALYs）等指标。运用Joinpoint回归分析趋势，分解分析法量化人口增长、老龄化和流行病学变化的贡献，集中指数评估健康不平等，XGBoost-SHAP机器学习识别死亡预测因子，并使用双样本孟德尔随机化对关键因子进行因果验证；分析按性别和社会人口指数（SDI）分层。 结果 全球NAFLD年龄标准化DALY率在男性（平均年度百分比变化［AAPC］=+0.34%）和女性（AAPC=+0.05%）中均呈上升趋势。分解分析显示，人口增长是全球DALYs增加的主要驱动力，而在高SDI地区，人口老龄化对男性死亡的贡献度达52.37%。健康不平等分析显示，2021年DALYs的集中指数为-0.05，负担向低SDI人群集中。机器学习识别吸烟（相对重要性=100%）和高龄（70~74岁：60%）为最关键死亡预测因素，模型测试集拟合优度良好（R²=0.98）。SDI分层分析显示吸烟和老龄化在不同SDI区域均位列前两位。孟德尔随机化进一步验证了吸烟起始（OR=1.35，P<0.05）与衰老（以衰弱指数代理，OR=2.01，P<0.05）与NAFLD风险间的正向因果关联。 结论 NAFLD负担沉重，存在性别与社会经济不平等。吸烟和高龄是关键风险因素，需制定整合烟草控制、老年健康管理与健康公平促进的针对性干预策略。

• 健脾滋肾方改善系统性红斑狼疮小鼠肾损害：基于p53-MDM2信号轴介导的铁死亡

  李云飞, 黄传兵, 庞利君, 朱子衡, 李明

  目的 基于鼠p53-双微体基因2（MDM2）信号轴探讨健脾滋肾方对系统性红斑狼疮（SLE）小鼠肾损害铁死亡的影响和治疗作用。 方法 30只SPF级MRL/lpr狼疮鼠采用随机对照表法分为模型（Model）组、健脾滋肾方（JPZS）组、泼尼松（Pred）组。另取10只C57BL/6小鼠为正常对照（Control）组。健脾滋肾方组予以JPZS悬液7.8 g·kg-1·d-1、泼尼松组予以泼尼松悬液5 mg·kg-1·d-1，正常对照组及模型组予生理盐水17.5 mL·kg-1·d-1，灌胃给予相应剂量药物，连续用药8周后取材监测。酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清抗双链DNA抗体（anti-ds DNA）；自动生化分析仪检测补体3（C3）、血肌酐（Scr）；考马斯亮蓝（CBB）法检测24 h尿蛋白（24 hPRO）含量；比色法检测肾组织铁离子（Fe2+）含量；硫代巴比妥酸法（TBA）检测丙二醛（MDA）、WST-1法测定超氧化物歧化酶（SOD）、微板法测定微量还原型谷胱甘肽（GSH）水平；流式检测肾组织ROS水平；组织病理学染色（HE、Masson、PAS）法观察肾组织病理学改变及定量分析；透射电子显微镜下观察肾脏足细胞线粒体形态变化；实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测p53、MDM2、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、长链酰基辅酶A合成酶4（ACSL4）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3） mRNA的表达情况。蛋白质印迹法检测GPX4、SLC7A11、ACSL4、Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达情况。 结果 与Control组相比，Model组dsDNA、Scr、24hPRO、Fe2+、MDA、ROS水平、p53、MDM2 mRNA表达水平、ACSL4、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.05），C3、SOD、GSH水平、GPX4、SLC7A11、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著下降（P<0.05）；与Model组相比，JPZS、Pred组dsDNA、Scr、24hPRO、Fe2+、MDA、ROS水平、p53、MDM2 mRNA表达水平、ACSL4、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01），C3、SOD、GSH水平、GPX4、SLC7A11、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。 结论 健脾滋肾方能够明显降低狼疮小鼠肾组织铁死亡水平，改善肾损害、修复肾功能，其机制或与抑制p53-MDM2信号轴有关；结合足细胞线粒体超微结构异常呈一致性改变，这一过程可能与肾小球足细胞相关的铁死亡损伤密切相关。

• 患儿个体与家庭特征对注意缺陷/多动障碍团体干预效果的预测：基于多维模型构建与分析

  杨新梅, 王咏琪, 莫晓华, 朱智航, 洪丹萍, 胡樱子, 彭凯琪, 徐艺轩, 刘锦岚, 郭文娟, 林绮文, 麦俊杰, 麦思茗, 卢京洁, 杨婵娟, 周燕玲, 程道猛, 余萌, 殷炜珍

  目的 基于多维干预成效指标，初步探究可能影响注意缺陷/多动障碍（ADHD）儿童团体干预响应的个体与家庭特征。 方法 纳入2023年7月~2025年1月在广州医科大学附属脑科医院参与干预项目的62例6~9岁ADHD儿童，接受为期4~6周（共8次）的标准化团体干预，内容聚焦于注意力训练与情绪调节训练。通过一般情况量表、小学生情绪调节困难问卷（DERS）、易激惹量表（ARI）、马特森儿童社会技能评价量表（MESSY）与SNAP-Ⅳ评定量表-父母版收集前后测数据。鉴于两组干预在形式与结构上的一致，遂合并数据开展建模分析。以注意缺陷、情绪调节、社交技能等三方面变量的变化作为结局指标，通过LASSO回归对18项前测变量（涵盖8项心理特征和10项人口学与家庭背景变量）进行筛选，进而构建多元线性回归模型，识别稳定预测因子。 结果 在注意缺陷、易激惹、情绪调节困难和过于强势/过度自信为结局变量的模型中，结局指标自身的基线得分为显著正向预测因子（β=0.462~0.669，P_BH<0.05）；敌对的前测得分对干预后情绪调节困难（β=-0.326，P_BH<0.01）、过于强势/过度自信（β=-0.543，P_BH<0.05）的改善表现出显著负向预测作用。 结论 本研究初步支持了基线症状、敌对特征对干预响应的预测作用。这些发现有助于在干预前对患儿的疗效进行初步预测，为实现ADHD的精准干预提供了可能的参考依据。

• 麦冬皂苷D通过激活β-catenin/FUNDC1/线粒体自噬轴减轻阿霉素诱导的小鼠心肌肥厚

  雷艳萍, 宋嘉晟, 徐乐吾, 刘睿, 赵岳

  目的 探讨麦冬皂苷D（OD）是否通过调控β-catenin/FUNDC1/线粒体自噬信号轴减轻阿霉素（Dox）诱导的心肌肥厚。 方法 通过Dox诱导心肌肥厚，分组如下：对照组，Dox刺激组，Dox刺激+OD治疗组，Dox刺激+感染AAV-β-catenin组，Dox刺激+感染AAV（腺相关病毒载体）组。细胞RNA测序分析Dox刺激组与对照组基因表达差异；Western blotting检测β-catenin，活化β-catenin，FUNDC1，LC3，p62，β-MHC（β肌球蛋白重链），α-actin；免疫组化/荧光检测β-catenin，FUNDC1；透射电镜检测线粒体损伤；染色质免疫共沉淀（ChIP）及双荧光素酶报告基因检测β-catenin对FUNDC1的转录调节作用。 结果 相比对照组，Dox刺激显著抑制β-catenin信号（P<0.001）和FUNDC1介导的线粒体自噬（P<0.001），导致线粒体损伤和心肌细胞肥大（P<0.001）。相比Dox组，OD处理可逆转上述效应，恢复β-catenin信号（P<0.001），增强FUNDC1转录与表达（P<0.001），并促进线粒体自噬，减轻心肌肥厚（P<0.001）。过表达β-catenin或FUNDC1均模拟了OD的心肌保护作用，而敲低β-catenin则加重心肌肥厚，且FUNDC1过表达可逆转该表型。机制上，β-catenin直接结合FUNDC1启动子并激活其转录。 结论 OD通过激活β-catenin/FUNDC1/线粒体自噬轴，增强线粒体质量控制，从而缓解Dox诱导的心肌肥厚。

• 谷氨酰胺诱导的自噬加剧恶病质裸鼠的肌肉萎缩：基于多组学分析

  李梓源, 苏小宇, 田智涵, 晁兴亮, 王咏, 马度芳

  目的 联合转录组学和代谢组学分析癌症恶病质中氨基酸（谷氨酰胺）是否通过诱导自噬促进肌肉萎缩。 方法 将20只BALB/c裸鼠随机分为正常组、模型组（n=10）。采用皮下移植CT-26细胞诱导恶病质模型，测量BALB/c裸鼠去瘤体质量、抓力/体质量比值、苏木素-伊红（HE染色）观察肌纤维横径，检测肌肉萎缩相关蛋白（MuRF1/Atrogin-1）。转录组学分析鉴定差异表达基因（DEGs），代谢组学分析差异代谢物（DEMs），绘制代谢通路图谱。透射电镜（TEM）观察自噬小体及腓肠肌形态、Western blotting检测自噬标志物（ULK1、LC3、P62）及信号通路蛋白（AMPK、FOXO3a及mTOR等）。经Gln+AMPK抑制剂处理的C2C12成肌细胞验证了关键实验结果。 结果 与对照组相比，模型组无瘤体质量（P<0.01）、抓力/体质量比值（P<0.0001）下降，肌纤维面积减少（P<0.05）以及Atrogin-1（P<0.01）、MuRF1（P<0.05）水平升高。DEGs主要富集于精氨酸/脯氨酸代谢、AMPK、mTOR、自噬及FOXO信号通路。代谢组学分析显示，恶病质肌肉中谷氨酰胺和谷氨酸水平显著升高。体内实验发现恶病质小鼠肌肉中自噬小体数量增加（P<0.01），肌纤维模糊断裂。AMPK、FOXO3a通路蛋白升高（P<0.05），同时ULK1（P<0.05）、LC3II/I蛋白（P<0.0001）表达水平显著上调，mTOR通路蛋白及P62蛋白下调（P<0.01）。体外实验表明，谷氨酰胺可促进C2C12细胞自噬进程，并促进AMPK、FOXO通路，抑制mTOR通路，而加入AMPK抑制剂则能阻断这些效应。 结论 谷氨酰胺通过激活AMPK/FOXO3a信号通路并抑制mTOR信号通路促进自噬，导致癌症恶病质肌肉萎缩。